摘要：目的 优化冰冻解冻去甘油红细胞的制备工艺，提高冰冻解冻去甘油红细胞的回收率。方法随机选取1u/袋的全血分离冰冻，改良去甘油洗涤方法，缩小洗涤液的浓度梯度，对比优化前后红细胞回收率。结果 优化后红细胞回收率有显著性提高（0.01）,且产品冰冻解冻去甘油红细胞中游离血红蛋白含量、甘油含量等指标均符合国家标准。优化后缩短制备时间约2小时。结论 优化制备方法，能缩短制备时间，并能提高冰冻解冻去甘油红细胞的回收率。

关键词：冰冻红细胞  冰冻解冻去甘油红细胞  甘油去除  红细胞回收率 浓度梯度

Rh(D)阴性血型在我国汉族人群中的比例约为0.4％，随着临床医生对稀有血型认识的不断提高，使得稀有血型的血液需求量不断增加。各家血站陆续开展了红细胞深低温保存，以及时保证临床供应，减少了稀有血型的浪费。深低温保存红细胞多用甘油作为红细胞冰冻保护剂，临床使用前解冻去甘油。为防止甘油冷冻保存的红细胞在融化、去甘油过程中的损伤，需采用不同浓度的洗涤液进行洗涤，使红细胞内液从高渗状态逐渐恢复到等渗，红细胞恢复正常形态和生理功能。目前国内多采用手工制备解冻去甘油红细胞，由于制备方法复杂，使得制品制备时间长，严重影响了临床急救用血，且最突出的问题是红细胞回收率低。针对这一问题，笔者对原有制备工艺进行技术优化，并通过对比研究，表明改良后的制备工艺明显优于改良前。

1 材料与方法

1.1 试验对象  随机选取采集3-5天的全血，一袋1u，通过离心分离制备成浓缩红细胞。优化前方法选取12u ， 优化后方法选取13u。

1.2 药品与仪器  57.1%的甘油、9％NaCl（北京博德桑特血袋厂）；羟乙基淀粉20氯化钠注射液（山东康宁药业有限公司）；0.9％NaCl（石家庄四药）；一次性输血器（山东威高）；杜邦离心机，脱色摇床。

1.3 红细胞甘油化  按每1ml浓缩红细胞加入57.1％甘油1.6ml计算甘油用量，使甘油化红细胞的终浓度为40%,平衡30分钟，离心去掉上清，使容量减小，以便快速冷冻。放-80°C冰箱内冻存。

1.4 去甘油洗涤方法优化前后流程

注：①离心条件：3000转/分钟，5分钟，22°C。

    ②5％盐水80ml是由9％盐水40ml加入0.9％盐水40ml而得。

检测及结果

2.1质量标准（2）：红细胞回收率≥80％，甘油含量≤10g/L，游离血红蛋白含量≤1g/L。

2.2检测：由质控科检测冰冻解冻去甘油红细胞上清液游离血红蛋白含量、甘油含量等，计算红细胞回收率。

2.3结果：冰冻解冻去甘油红细胞上清液游离血红蛋白含量、甘油含量均符合国标要求， 红细胞回收率见表：

两种制备方法红细胞回收率的对比（x¯±s）

讨论技术优化的目的是缩短制备时间，尽可能减少红细胞在制备过程中的破坏和丢失，提高红细胞回收率。笔者的实验结果表明，技术优化后的红细胞回收率显著高于优化前，其它指标也符合国标要求。优化后的制备方法特点：① 缩短制备时间：加液时间由原来的160分钟减为50分钟，缩短近2小时，为临床急救用血赢得了宝贵的时间。② 增加一个盐水梯度，使红细胞内的渗透压由高渗向等渗过渡更平稳，减少了红细胞的破坏。③ 适当增加洗涤液量，能更有效的去除残余物，同时去上清时尽量保留界面上的红细胞，以减少红细胞随洗涤废液的丢失。

参考文献

1 王培华主编. 输血技术学（全国高等医学院校教材）. 人民卫生出版社 1998，27

2 中华人民共和国.国家标准GB18469-2001.全血及成分血质量要求